膀胱癌多药耐药基因产物的表达及临床意义

中华实验外科杂志 1999年第1期第16卷 膀光肿瘤

作者：李晓飞　王晓波　陈立中

单位：510080　广州，中山医科大学附属第一医院泌尿外科

　　关键词： 膀胱肿瘤；药物耐受性；基因

　　【摘要】　目的　探讨膀胱癌组织的多药耐药基因(mdr-1)产物P-糖蛋白(P-GP)的表达情况。方法　应用LSAB免疫组化技术研究25例初发膀胱癌及16例复发膀胱癌的P-GP阳性表达。结果　初发膀胱癌P-GP阳性表达率48%，复发膀胱癌P-GP阳性表达率87.5%，复发性膀胱癌P-GP阳性表达率明显高于初发肿瘤(P＜0.05)。不同病理分级、临床分期间的P-GP阳性表达率无显著性差异(P＞0.05)。结论　膀胱癌的P-GP阳性表达水平与肿瘤病理分级及临床分期无关。复发性膀胱癌有较高的P-GP表达是由于肿瘤接触化疗药物后，mdr-1基因扩增所致。P-GP的过度表达可能是膀胱癌腔内化疗失败的重要原因之一。

　　 Expression of mdr-1 gene product in bladder cancer and its clinical significance Li Xiaofei, Wang Xiaobo, Chen Lizhong. Department of Urology, The First Affiliated Hospital, Sun Yat-sen University of Medical Sciences, Guangzhou 510080

　　 　　【Abstract】　Objective To detect the expression of p-glycoprotein (P-GP) encoded by multidrug resistance (mdr-1) gene in bladder cancer.Method Positive expression of P-GP was studied by using labeled strepavidinbiotin in 25 cases of primary bladder cancer and in 16 cases of recurrent bladder cancer. Result Positive expression of P-GP was 48% in primary bladder cancer, and 87.5% in recurrent bladder cancer following chemotherapy. The recurrent bladder cancer had a higher positive expression rate than primary bladder cancer (P＜0.05). No correlation was found between the pathological grade, and the clinical stage for expression of P-GP (P＞0.05). Conclusion The level of P-GP expression was not correlated with the tumor pathological grade and malignant behavior. The tumor contacting chemotherapeutic drug might cause mdr-1 gene amplification and a higher expression of P-GP in recurrent bladder cancer, which might be an important factor in intravesical chemotherapeutic treatment failure.

　　 　　【Key words】 Bladder neoplasm Drug tolerance Genes

　　膀胱肿瘤是最常见的泌尿系恶性肿瘤，具有局部易复发的生物学特性。为探讨膀胱肿瘤对化疗药物不敏感，是否与肿瘤多药耐药基因(mdr-1)基因产物P-糖蛋白(P-GP)的过度表达有关，我们用免疫组化方法对41例膀胱癌的mdr-1基因产物P-GP进行研究，现报道如下。

　　材料与方法

　　1. 收集1993年12月～1995年12月间保留膀胱的肿瘤切除术后肿瘤蜡块标本。其中初发肿瘤25例，化疗后复发肿瘤16例。WHO病理组织分级标准：G₁13例，G₂21例，G₃7例。临床分期Ta15例，T₁16例，T₂10例。膀胱癌石蜡块行4μm连续切片，60℃烘烤2小时，待免疫组化，ABC染色用。

　　2. 主要试剂　一抗抗P-GP兔抗人多克隆抗体为Oncogene Science公司产品，二抗生物素化的羊抗兔IgG和LSAB (Labelled Strepavidin-biotin)为DAKO产品。

　　3. 石蜡切片脱蜡入水后，用胃蛋白酶消化10分钟，在枸橼酸缓冲液内放入微波炉(解冻档)煮15分钟，然后经过氧化氢甲醇液封闭内源性过氧化物酶30分钟，1%胎牛血清37℃ 30分钟，一抗(1∶10)4℃过夜。二抗(1∶400) 37℃ 30分钟，LSAB(1∶400) 37℃ 30分钟，DAB染色(每步结束均用0.05mmol/L pH7.4 PBS缓冲液浸洗)。苏木素复染，脱水，透明，封片。

　　4. 结果判断　根据P-GP的表达与分布，以DAB阳性染色物的反应程度分为：阴性(-)，阳性与部分阳性(+)及强阳性(++)。阴性对照以TBS代替一抗。

　　结　果

　　1. P-GP阳性表达特征　强阳性染色切片：阳性染色物质为棕色，弥漫分布于肿瘤浅层及深层细胞。阳性切片：染色物质为棕黄色，局灶分布于肿瘤浅、深层细胞。部分阳性切片：染色物质为深黄色，局灶分布于肿瘤表层细胞。全部染色切片无非特异背景染色，阳性与阴性对比鲜明。

　　2. 膀胱癌的P-GP表达情况　41例膀胱肿瘤标本P-G P阳性表达26例，占63.41%。其中强阳性占24.39%(10/41)，阳性及部分阳性39%(16/41)。

　　3. 初发肿瘤与复发肿瘤P-GP表达比较见表1。肿瘤的病理分级与P-GP表达的关系见表2。临床分期与P-GP表达的关系见表3。

表1　初发肿瘤与复发肿瘤P-GP阳性比较

　　注：P＜0.05

表2　病理分级与P-GP表达的关系

　　注：P＞0.05

表3　临床分期与P-GP表达的关系

　　注：P＞0.05

　　 讨　论

　　本组研究应用免疫组化技术检测41例膀胱癌的P-GP表达情况，总体阳性率63.41%。25例初发肿瘤的P-GP表达阳性率48%(12/25)，而化疗后复发肿瘤P-GP表达阳性率高达87.8%(14/16)。复发肿瘤P-GP表达阳性率显著高于初发肿瘤。这提示可能由于接触抗癌药物后mdr-1基因扩增及P-GP过度表达，致使化疗失败，肿瘤复发。

　　Shinohara^［1］对83例肾盂和输尿管肿瘤的P-GP表达进行研究，发现P-GP的表达与肿瘤的分级、分期无关。本组研究结果发现不同病理分级之间及不同临床分期之间P-GP的阳性表达无显著性差异，得出的结论与Shinohara^［1］一致。因此，可以看出即使同级或同期的膀胱癌，其P-GP表达的量也可不同，有的阴性，有的呈强阳性。而级数或期数较高，P-GP的阳性表达不一定高。肿瘤的分级及临床分期只能代表肿瘤细胞的分化程度和肿瘤的恶性浸润程度，并不能代表其耐药性的差异。通过对P-GP的检测，可指导化疗药物的选择或采用其它局部免疫治疗方法防止膀胱癌复发。

　　 参考文献

　　1　Shinohara N, Nomomuka K, Takakura F, et al. Expression of multidrug resistance product (p-glycoprotein) in transitional cell carcinoma of the upper urinary tract. Eur Urol, 1994, 5:327-333.

(收稿：1997-12-10　修回：1998-03-14)