《中国生物制品规程》 > 生物制品化学规定规程

O-乙酰基含量测定

1 试剂

1.1 2mol /L 盐酸羟胺,冷处保存。

1.23.5mol /L 氢氧化钠。

1.3 4mol /L 盐酸

浓盐酸(比重1.18)1份,加2份蒸馏水稀释。

1.40.37mol /L 三氯化铁(FeCl3·6H2O),溶解于0.1mol /L 盐酸内。

1.50.001mol /L 醋酸钠(pH4.5)。

1.62.5mmol /L 的氯化乙酰胆碱液

精确称取已干燥至恒重的氯化乙酰胆碱22.7mg,用0.001mol /L 醋酸钠液(pH4.5)溶解,移入50ml容量瓶中,用0.001mol /L 醋酸钠液稀释至刻度。

2 操作

2.1 样品

精确量取样品1ml(含O-乙酰基0.5~2.5μmol)置于试管中,加2ml新鲜配制的碱性羟胺液(等体积的2mol /L 盐酸羟胺与3.5mol /L 氢氢化钠混合,3小时内可用),摇匀,于室温放置4分钟,加1ml 4mol /L 盐酸,使pH为1.2±0.2,摇匀,加1ml 0.37mol /L 三氯化铁,摇匀,于540nm比色,同时作一样品空白,取样品1ml于试管中,先加1ml 4mol /L 盐酸,后加2ml碱性羟胺(即加酸与加碱性羟胺的次序颠倒),加三氯化铁等操作同上。

2.2 标准曲线

精确量取氯化乙酰胆碱(或溴化乙酰胆碱)标准液0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml,分别置于试管中,加蒸馏水补至1ml,其余操作同样品,同时作标准空白,即作与上相同的系列标准管,只是加酸与加碱性羟胺的次序颠倒,其他操作均同。

3 计算

标准管比色读数分别减去各自空白比色读数,然后画出标准曲线。样品比色读数减去其空白读数,再从标准曲线查出品相当标准液之ml数A。

样品O-乙酰基含量(mmol /L)=A×2.5

附注

也可采用WHO规程法,但应相应提高样品用量。