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胃癌中癌基因ras c-myc mRNA表达的临床意义

胃癌中癌基因ras c-myc mRNA表达的临床意义

世界华消化杂志 1998年第2期第0卷 研究原著

作者:施秀清1 李 功1 李春生1 倪灿荣2 栾 汛1 曲 阳1

单位:1解放军203医院消化内科 黑龙江省齐齐哈尔市 161000;2第二军医大学病理教研室

关键词:基因,ras;基因,MYC;RNA,信使/分析;基因表达;胃肿瘤/遗传学

Oncogene ras, c-myc mRNA expression in gastric carcinoma and its clinical significance

  SHI Xiu-Qing1, LI Gong1, LI Chun-Sheng1, NI Chan-Rong2, LUAN Xun1 and QU Yang1

  1Department of Gastroenterology, Department of Pathology Chinese PLA 203 Hospital, Qiqihaer 161000

  2Department of Pathology, the 2nd Military Medical University, Shanghai

  Subject headings genes, ras; genes, myc; RNA, messenger/analysis; gene expression

   AbstractAbstract

  AIM To study the independent and combined effects of ras and c-myc mRNA expression in the tumor occurrence and to seek evidence for early diagnosis of gastric carcinoma.

  METHODS In situ hybridization histochemistry(ISH) was used to examine the expression of H-ras, K-ras, C-myc mRNA in 88 cases of gastric carcinoma tissue, and an analysis with clinical data was made.

  RESULTS K-ras, h-ras and C-myc mRNA expression rate in the tumor tissues was 78.4%, 70.5% and 58.0%, and it was 28.4%,27.3% and 20.5% in the neighboring regions of the tumor respectively, with a tendency of step-down. The oncogene expression was not related to clinical and pathological type and the metastasis to lymph nodes. C-myc mRNA expression was closely related to the survival time of patients (P<0.05).

  CONCLUSION K-ras, h-ras and C-myc mRNA expression is a valuable reference for the early diagnosis of gastric carcinoma.

  中国图书资料分类号 R735.2

  摘 要

  目的 探索癌基因ras和c-myc mRNA在胃癌发生中单独和协同作用关系,选择胃癌的早期诊断依据.

  方法 应用原位分子杂交(ISH)技术,检测88例胃癌组织中H-ras,K-ras, c-myc mRNA的表达,结合临床资料综合分析.

  结果 K-ras,H-ras,C-myc mRNA在肿瘤区的阳性表达分别为78.4%,70.5%和58.0%,在癌旁区的阳性表达分别为28.4%,27.3%和20.5%,呈梯度下降趋势,3种癌基因的表达与胃癌的临床分型、组织学分类及有无淋巴结转移无关,C-myc mRNA的表达与患者生存期关系密切(P<0.05).

  结论 K-ras,H-ras,C-myc mRNA的表达可作为胃癌早期诊断的参考依据.

  0 引言

  胃癌是我国最常见的恶性肿瘤之一,其生存率的提高有赖于搞好二级预防,以及时地检出癌前病变或早期癌. 目前胃癌的基础研究已进入了分子和基因水平阶段. 作者应用原位分子杂交技术检测88例胃癌肿瘤区、移行区和癌旁区粘膜的癌基因K-ras,H-ras和C-myc mRNA的表达,并与正常粘膜组织对照,旨在探讨其在胃癌的发生、发展中各自和协同作用关系、作用范围、阶段和从分子水平估计预后,为选择胃癌的早期诊断和治疗方法提供依据.

  1 对象和方法

  1.1 对象 胃癌组织88例均系本院1990年以来胃癌手术切除标本;男62例,女26例,年龄35岁~70岁,平均53.2岁;临床分型:蕈伞型9例,溃疡型50例,浸润型29例;组织学分类:高分化腺癌10例,中分化腺癌39例,低分化腺癌30例,粘液腺癌9例;正常粘膜5例. 有随访结果53例,其中术后生存期>3a者29例,<3a者24例.

  1.2 方法

  1.2.1 标本制备 胃癌组织标本均严格按标准取材后固定在40g/L多聚甲醛(1g/L DEPC消毒水配制)18h,150g/L蔗糖缓冲液浸泡标本24h,均用新鲜乙醇、二甲苯脱水、透明、包埋,4μm石蜡切片,切片时尽量避免RNasc污染.

  1.2.2 探针与标记 K-ras, H-ras, C-myc(均由日本国立预防研究所小山浩赠送),生物素标记缺口平移Kit购自美国Enzo公司,按说明书方法操作[1,2].

  1.2.3 操作步骤 切片用新鲜乙醇,二甲苯脱蜡至无菌水中,无菌PBS洗,按文献报道适当修改的方法进行[3,4],微波三挡浸在缓冲柠檬酸盐(0.01mol/L,pH 6.0)中5min×2(95℃),蛋白和核酸分离,PBS洗,蛋白酶K(2mg/L),37℃,30min,PBS洗,40g/L多聚甲醛固定5min;PBS洗,乙醇脱水,2.5g/L乙酸酐(内含0.1mol/L三乙醇胺9g/L NaCl,pH 8.0)洗10min. 预杂交:0.5kg/L去离子甲酰胺:2×ssc 42℃,3h;杂交:杂交液中内含探针浓度2mg/L,5ml去离子甲酰胺,2ml 20×ssc, 0.5ml 10g/L变性鲑精DNA,2ml 0.5kg/L硫酸葡聚糖,0.2ml 50×Denhardt, k-ras, H-ras和C-myc cDNA探针45℃杂交18h. 杂交后洗,均生物素化,抗生物素抗体1∶1000, 37℃ 1h,ABC复合物1∶100,37℃ 40min,DAB-HO显色8min. 结果判定标准及对照设计,参考有关文献[5,6].

  2 结果

  K-ras,H-ras和C-myc mRNA在胃癌中的表达见表1-4.

  表1 癌基因mRNA在胃癌中的表达

mRNA癌基因 肿瘤区 癌 旁 不典型增生 正常粘膜
n % n % n∶9 n∶5
K-ras 69 78.4 25 28.4 3/9 0
H-ras 62 70.5 24 27.3 3/9 0
C-myc 51 58.0 18 20.5 2/9 0

  表2 癌基因mRNA在不同类型胃癌中的表达

癌组织类型 K-ras H-ras C-myc
n % n % n %
高分化 7/10 70.0 7/10 70.0 5/10 50.0
中分化 34/39 87.2 32/39 82.0 27/39 69.2
低分化 21/30 70.0 15/30 50.0 14/30 46.7
粘液 7/9 77.7 8/9 88.8 5/9 55.6
蕈伞型 7/9 77.8 7/9 77.8 5/9 55.6
溃疡型 36/50 72.0 32/50 64.0 31/50 62.0
浸润型 19/29 65.6 17/29 58.6 16/29 55.2

  表3 癌基因mRNA表达与淋巴结转移

淋巴结转移 n K-ras H-ras C-myc
+ - + - + -
63 49 14 46 17 36 27
25 20 5 17 8 11 14

  表4 癌基因mRNA表达与术后生存的关系

生存期(a) n K-ras H-ras C-myc
- + - + - +
>3 29 14 15 14 15 11 18
<3 24 10 14 11 13 16 8

  3 讨论

  应用原位分子杂交技术对88例胃癌组织检测的结果表明,K-ras,H-ras,C-myc mRNA在肿瘤区的阳性表达率分别为78.0%,70.0%和58.0%;癌旁组织及移行区正常粘膜上皮的阳性表达率分别为28.4%,27.3%,20.5%和18.2%,17.0%,19.3%,正常粘膜均呈阴性反应,与肿瘤区相比差异均有非常显著意义(P<0.01);阳性表达从肿瘤区至癌旁区正常粘膜呈梯度下降趋势. 上述结果提示,胃癌细胞具有癌基因的激活、突变,与文献报道[7-10]结果一致. 癌旁粘膜上皮也有K-ras,H-ras和C-myc阳性表达,提示该区已有癌基因的突变和激活,细胞已非属正常细胞,有恶性转化的可能. 3种癌基因mRNA表达与肿瘤的分化程度及临床分型无统计学意义(P>0.05). 与淋巴结有无转移无关(P>0.05). c-myc基因定位于类8号染色体上,其编码Mr 62 000产物有直接调节其他基因转录作用. Ninomiya et al[10]应用C-myc产物检测213例胃癌,其阳性率为23.5%,浸润型生长者多见,但与淋巴结转移,组织学类型及血管、淋巴管侵犯无关. 本研究应用C-myc探针检测88例胃癌中mRNA的表达,其阳性率要高于Ninomiya等的报道,同样与淋巴结转移,组织学类型无关. k-ras,H-ras,mRNA在胃癌中的表达与肿瘤患者的生存期无关,而C-myc mRNA表达与患者的存活期关系密切(P<0.05)与文献报道一致[7-10].

  总之,细胞癌变是多癌基因变异累积的结果. 因此对多癌基因检测的高表达,可作为胃癌患者早期诊断的一个有价值的参考依据,对临床治疗具有一定的指导意义.

  施秀清,女,1947-10-18生,黑龙江省哈尔滨市,汉族. 1972年毕业于延边医学院医疗系,主治医师,感染控制科主任,主要从事消化疾病的诊治研究.

  通讯作者 施秀清,161000,解放军203医院消化内科,黑龙江省齐齐哈尔市建设大街59号.

  Correspondence to: Dr. SHI Xiou-Qing, Department of Gastroenterology, Department of Pathology, Chinese PLA 203 Hospital, 59 Jianshe Street, Qiqihaer 161000, Heilongjiang Province, China

  Tel. +86*452*2112355-4431

  收稿日期 1997-05-06 修回日期 1997-09-03

  4 参考文献

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