bcl-2，c-myc和p53在大肠腺瘤和大肠癌中的表达
现代诊断与治疗 2000年第2期第12卷 论著
单位：孙燕翔（上海市北医院，上海 200435）；周汉高（上海市北医院，上海 200435）；陈崇稼（上海市北医院，上海 200435）；冯蔚鹰（上海市北医院，上海 200435）；师英强（上海医科大学肿瘤医院，上海 200032）；郑颂国（上海医科大学肿瘤医院，上海 200032）；罗建民（上海医科大学肿瘤医院，上海 200032）
关键词：bcl-2；p53；c-myc；细胞凋亡；大肠肿瘤
摘 要：目的 探讨癌基因bcl-2，c-myc和p53在大肠腺瘤与大 肠癌中的表达情况及与临床病理特征的关系。方法 采用免疫组化ABC法， 检测63例大肠癌和40例大肠腺瘤的bcl-2，c-myc和p53表达。结果 bcl -2，c-myc和p53在大肠腺瘤中的表达分别为72.7%(24/33)、62.2%(23/37)和45.0%(18/40) ，而在大肠癌中的表达则依次为34.0%(16/47)、82.1%(32/39)和84.1%(53/63)。三个癌基因 在大肠腺瘤和大肠癌中的表达均有显著的统计学意义(P＜0.01)，但三个癌基因的表达与 临床病理特征无显著的相关性。结论 bcl-2基因的异常激活在肿瘤的发 展和演变出现较早，而c-myc和p53的表达则较迟，且两者起协同作用。
分类号：R735.3+4 文献标识码：A
文章编号：1001-8174(2000)02-0081-02
Expression of bcl-2，c-myc and p53 in Colorectal Adenoma and Carcinoma
SUN Yan-xiang ZHOU Han-gao CHEN Chong-jia FENG Wei-ying
（Shibei Hospi tal of Shanghai,Shanghai 200435,China）
SHI Ying-qiang ZHENG Song-guo LUO Jian-min
（Cancer Hospital,Shanghai Medical Univers ity,Shanghai 200032,China）
Abstract：Objective To investigate the expressions of on cogenes bcl-2，c-myc and p53 in colorectal adenoma and adenocarcinoma,and the relationship between the expression of oncogene and clinical pathological features.Method Expression of oncogene bcl-2 were determinated in 33 cases of colorectal adenomas and 47 cases of colorectal carcinomas by the immunohistochemical method(ABC method).Expression of p53 in 40 cases of colotectal a denomas and 63 cases of colorectal carcinomas,in addition to c-myc protein in 3 7 cases of adenoma and 39 cases of colorectal adenocarcinomas were also determinated.Results The positive expression rates of bcl-2 in colorec tal adenoma and adenocarcinoma were 72.2%(24/33) and 24.2%(16/47) respectively,and those of p53 were 45.0%(18/40) and 84.1%(53/63) respectively.The Positive sta ining rates of c-myc in colorectal adenoma and adenocarcinoma were 62.7%(23/37) and 82.1%(30/39) respectively.There were significant differences between the expressions of these three oncogenes in colorectal adenoma and in adenocarcinoma( P＜0.01).However,the expression of these three oncogenes were not correlated with clinical pathological features.Conclusions The abnormal activation in bcl-2 takes place earlier during the development and progression of colorectal adenocarcinoma.But c-myc and p53 express later and cooperate with each other in progression of colorectal adenocarcinoma.
Key words：bcl-2;p53;c-myc;Cellar apoptosis;Colorectal carcino mas
业已证明，bcl-2抑制由野生型p53激发的细胞凋亡，且突变的p53也显示抑制细胞凋亡［1］。而c-myc与p53的共同表达在肿瘤的发展过程中可能起协同作用。大肠肿瘤提供了研究肿瘤的理想模式，即大多数癌似乎来源于腺瘤。并可分析各期肿瘤的发展情况。作者分析了bcl-2和c-myc在正常粘膜、腺瘤和癌肿时的表达情况。
1 材料与方法
1.1 病例与标本 63例大肠腺癌和40例大肠腺瘤标本均来自本院和闸北区中心医院手术切除的标本。另取10例正常组织或癌旁正常组织作对照。肿瘤临床分期采用Dukes分期。标本用10%福尔马林固定后石蜡包埋，切成5μm厚切片。
1.2 免疫组化染色 免疫组化方法采用ABC法，试剂盒均为丹麦Dako公司产品。工作深度为1∶60。正常组织或癌旁正常组织作为对照。阳性程度的判断标准：以细胞核或胞浆染成棕黄色颗粒为阳性。按半定量法即以染色的深度分为4级：不染色或染色＜5%为(-)，染色5%～25%为(+)，染色25%～50%为()，染色＞50%为()。
1.3 统计学处理 应用Ridit和χ2检验作统计学处理，以P＜0.05为有统计学意义。
2 结果
2.1 正常粘膜染色 bcl-2均为(+)～(++)，染色限于基底上皮细胞。c-myc染色大多为(-)，偶见表浅部分为(+)。p53染色均为(-)。
2.2 大肠腺瘤和大肠癌染色 bcl-2染色表达分别为72.7%(24/33)和34.0%(16/47)。c-myc在大肠腺瘤和大肠癌的染色分别为62.6%(23/37)和82.1%(32/39)。p53染色分别为45%(18/40)和84.1%(53/63)。表明bcl-2，c-myc和p53在大肠腺瘤和大肠癌中的染色均有显著统计学意义(见表1，P＜0.01)。
表1 大肠腺瘤与大肠癌的bcl-2，c-myc和p53染色表达情况(n)
| 染色 |
bcl-2 |
c-myc |
p53 |
| 腺瘤 |
腺癌 |
腺瘤 |
腺癌 |
腺瘤 |
腺癌 |
| (-) |
9 |
31 |
14 |
7 |
22 |
10 |
| (+) |
16 |
10 |
12 |
10 |
9 |
31 |
| (++) |
7 |
3 |
8 |
8 |
8 |
11 |
| (+++) |
1 |
3 |
3 |
14 |
1 |
11 |
| U值 |
3.963 |
2.762 |
3.340 |
| P值 |
＜0.01 |
＜0.01 |
＜0.01 |
2.3 大肠癌的bcl-2，c-myc和p53表达与临床病理特征 见表2。
表2 大肠癌的bcl-2，c-myc和p53表达与临床病理特征关系(n)
| |
|
bcl-2 |
c-myc |
p53 |
| (-)～(+) |
(++)～(+++) |
(-)～(+) |
(++)～(+++) |
(-)～(+) |
(++)～(+++) |
| 年龄 |
≤60岁 |
7 |
0 |
2 |
6 |
9 |
3 |
| |
＞60岁 |
31 |
6 |
13 |
15 |
29 |
19 |
| 部位 |
结肠 |
30 |
3 |
12 |
14 |
29 |
15 |
| |
直肠 |
11 |
3 |
5 |
8 |
12 |
7 |
| 分化程度 |
高 |
3 |
0 |
0 |
1 |
2 |
1 |
| |
中 |
26 |
7 |
13 |
13 |
29 |
16 |
| 低 |
11 |
1 |
3 |
9 |
10 |
5 |
| 浸润深度 |
粘膜下 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
0 |
| |
肌层 |
8 |
0 |
4 |
4 |
11 |
4 |
| 浆膜 |
22 |
4 |
9 |
13 |
21 |
14 |
| 浆膜下 |
10 |
2 |
4 |
5 |
9 |
4 |
| 淋巴结转移 |
无 |
25 |
5 |
11 |
12 |
27 |
15 |
| |
有 |
15 |
1 |
6 |
10 |
14 |
7 |
| Duke's分期 |
A |
3 |
0 |
3 |
0 |
3 |
2 |
| |
B |
14 |
3 |
5 |
5 |
16 |
6 |
| C |
11 |
1 |
3 |
7 |
9 |
10 |
| D |
6 |
2 |
3 |
4 |
7 |
2 |
3 讨论 肿瘤细胞的增生取决于两个主要因素：细胞的增殖和由凋亡引起的细胞死亡。凋亡或程序性细胞死亡(PCD)在组织的发生、分化和内稳态的调节中起重要作用。凋亡的失调可能与癌的发生有关，这在恶性淋巴瘤中得到证实。与凋亡较为密切的癌基因是bcl-2，c-myc和p53。bcl-2无论在生理和肿瘤形成的情况下，均可以通过抑制细胞凋亡而调节细胞的运动。作为一种原癌基因，可以通过阻止PCD而有利于肿瘤细胞的生长，c-myc在细胞周期循环的控制中起重要的作用，即在细胞的增生过程中，c-myc可能驱使细胞从G0期进入G1期，从而由静止期激活DNA合成。换句话说，当刺激静止期的细胞增殖时，c-myc的表达增强，当发生终末分化时，c-myc的表达则减弱，其调节通常是在转录和转录后水平［2］。p53抑癌基因的丢失可发生在50%以上的肿瘤患者中。p53主要是充当G1/S期中检查点的作用。DNA作用发生损伤时，防止细胞进入S期，并阻止损伤的DNA复制。如果这种损伤不能有效修复，凋亡系统就会被启动，导致细胞凋亡。当p53发生突变时，细胞失去了这种重要的监视机制，因而使DNA有损伤的细胞继续在循环中周转，这就为恶性细胞的形成提供了条件。实验表明，bcl-2蛋白的过度产生可以抵消p53诱导细胞死亡。如果bcl-2蛋白达到足够的水平，p53不再诱导凋亡，这就意味着p53和bcl-2又能参与细胞生长和生长的共同通道。Hermeking等［3］认为，通过c-myc，野生型p53诱导G1期静止的发生可能是作为凋亡的激活因子。尽管存在大量的野生型p53蛋白，c-myc也能驱使细胞从G1期进入S期。即p53引起G1期静止再同内源性c-myc共同激发凋亡［4］。所以c-myc和突变型p53所起的是协同作用。
本研究发现正常肠粘膜的基底上皮细胞表达bcl-2，这种bcl-2的免疫定位保护干细胞发生凋亡。而肠粘膜的表浅部分不表达bcl-2，提示bcl-2表达的丢失在大肠上皮的分化中是一种正常的变化。bcl-2在大肠癌中的表达(34.0%)明显低于大肠腺瘤中的表达(72.7%，P＜0.01)。bcl-2基因的异常激活在大肠癌的形成和发展中发生得较早。
本研究也发现c-myc在正常大肠上皮中，大多为阴性，仅部分有弱阳性表达，与文献中报道相符［2］。c-myc在大肠腺瘤中的染色(62.2%)明显低于大肠癌中的染色(82.1%，P＜0.01)。该结果表明，c-myc在大多数肠癌的演变中增加［2］，而在腺瘤和腺癌中，p53的染色分别为45.0%和84.1%(P＜0.01)，说明p53在大肠的癌变中进行性增加，但发生得较晚［5］。
本研究尚未发现bcl-2，c-myc和p53与临床病理改变的相关性(P＞0.05)，此与文献报道［2，5，6］相一致。另有文献［7］报道bcl-2阳性组的大肠癌其生存期明显优于bcl-2阴性组，表明bcl-2同较低的恶性程度有关。我们将进一步对该组病例进行随访报道。
吴旻院士 审
作者简介：孙燕翔(1963-)，男，安徽郎溪人，1985年安徽医科大学毕业，1992年在上海医科大学肿瘤医院进修 。学士，主治医师，研究方向为肿瘤基础与临床。
参考文献：
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［2］Jones DJ,Ghosh AK,Moore M,et al.A critical appraisal of the immunohi stochemical detection of the c-myc oncogene product in colorectal cancer［J］. Br J Cancer,1987,56(6):779-783.
［3］Hermeking H,Eick D.Mediation of c-myc-induced apoptosis by p53［J ］.Science,1994,265(5181):2091-2093.
［4］Wyllie AH.Apoptosis(the 1992 Frank Rose Memorial Lecture)［J］.Br J Cancer,1993,67(2):205-208.
［5］Watson AJM,Merritt AJ,Tones LS,et al.Evidence for reciprocity of bcl -2 and p53 expression in human colorectal adenomas and carcinomas［J］.Br J Cancer,1996,73(3):889-895.
［6］Pereira H,Silva S,Juliao R,et al.Prognostic markers for colorectal c ancer:expression of p53 and bcl-2［J］.World J Surg,1997,21(2):210-213.
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收稿日期：1998-12-29
修回日期：1999-09-28
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