CD44v6表达与胰腺癌增殖、转移及预后关系的研究
中国肿瘤临床 2000年第4期第27卷 论著
作者：李玉军 张华 郝青
单位：李玉军 青岛医学院附属医院病理科(青岛市 266003)；张华 青岛医学院附属医院病理科(青岛市 266003)；郝青 山东省惠民地区中心医院
关键词：CD44；胰腺癌；转移；预后
摘要 目的：探讨CD44v6表达与胰腺癌增殖活性、淋巴结转移以及预后的关系。方法：应用免疫组化LSAB法检测47例胰腺癌组织中CD44v6和PCNA的表达。结果：CD44v6阳性率为57.4 ％(27/47)，与胰腺癌组织学类型及分级无关；伴淋巴结转移者CD44v6阳性率(81.0％,17/21 )明显高于无淋巴结转移者(38.5％,10/26)，两者间有极显著性差异(χ2=8.58,P＜0.01);CD44v6阴性者术后1年生存率为30.0%(6/20),而阳性者为3.7%(1/27),两者间有显著性差(χ2=6.28,P＜0.05);阳性染色的胰腺癌组织PCNA标记率较阴性者高(χ2=4.63,P＜0.05).结论:在胰腺癌的增殖及转移过程中起重要作用,并可作为预测胰腺癌预后的生物学标志.
Expression of CD44v6 in Human Pancreatic Cancer
Li Yujun Zhang Hua Hao Qing
(Department of Pathology, Affiliated Hospital of Qingdao Medical College, Qingdao)
AbstractObjective: To study the relationship between the hyperplastic grading, lymph node metastasis, prognosis and the expression of CD44v6 in human pancreatic cancer.Methods: The expression of CD44v6 and PCNA in 47 pancreatic cancers were determined with LSAB immunohistochemical technique.Results: The positive rate of CD44v6 staining was 57.4％ (27/47) in these patients, while the positive rate in patients with lymph node metastasis was 81.0％ (17/21) which was significantly higher than that without lymph node involvement (38.5％,χ2=4.63,P＜0.0１).Positive expression of CD44v6 was associated with shorter postoperative survival and the relationship was significant (χ2=6.28，P＜0.05).The hyperplastic grade was related with the expression of CD44v6(χ2=4.63，P＜0.05).Conclusion:CD44v6 plays an important role in hyperplasia and metastasis of pancreatic cancer and may serve as a biological marder to predict the prognosis of patients with pancreatic cancer.
Key Words CD44v6 Pancreatic cancer Metastasis Prognosis
CD444分子是一种跨膜糖蛋白，是细胞粘附分子之一。因其介导着肿瘤细胞与宿主细胞和 细胞外基质的互相作用，而成为研究肿瘤转移及预后的热点。其中以含有外显子v6的CD44变 异体(CD44v6)与肿瘤的关系较密切[1,2]。本文应用免疫组化LSAB法检测47例胰腺癌组织 中CD44v6及增殖细胞核抗原(PCNA)的表达，探讨其与胰腺癌生物学行为和预后的关系。
1 材料与方法
1.1 材料
47例胰腺癌标本取自我院1983～1993年外科手术治疗患者，均有详细的手术记录和完整 的随访资料。男性29例，女性18例，年龄27～75岁，平均56.7岁。术前均未接受化疗及放疗 。病理学类型：高分化腺癌23例，低分化腺癌19例，粘液腺癌4例，未分化癌1例。按Bloom －Richardson评分标准进行组织学分级：Ⅰ级15例，Ⅱ级20例，Ⅲ级12例。术后生存超过1 年者7例(14.9％)。
1.2 方法
所有标本均经福尔马林固定，石蜡包埋，连续切厚4μm切片，分别作HE和LSAB法染色。抗CD44v6鼠单克隆抗体购自美国RD公司，PCNA和LSAB试剂盒为武汉博士得公司产品。操作按说明书进行，微波修复，DAB显色。PBS代替一抗作阴性对照。CD44v6阳性信号为细胞膜呈棕黄色（图1），根据阳性细胞所占比例分为阴性(－)，阳性细胞数＜10％；阳性(＋)，阳性细胞数≥10％。癌细胞增殖活性PCNA的定级：PCNA阳性信号定位于细胞核（图2），当阳性核染色≤25％时定为Ⅰ级，26％～50％时为Ⅱ级，51％～75％时为Ⅲ级，≥76％时为Ⅳ级。将Ⅰ/Ⅱ级定为低增殖活性，Ⅲ/Ⅳ级定为高增殖活性。
图1 CD44v6阳性信号为细胞膜呈棕黄色
图2 PCNA阳性信号定位于细胞核
1.3 统计学处理
本文数据结果的统计和分析采用卡方检验。
2 结果
2.1 CD44v6表达与胰腺癌组织学类型和分级的关系
47例胰腺癌组织CD44v6表达阳性率为57.4％(27/47)。虽然低分化腺癌CD44v6阳性率(73.7％,14/19)高于高分化腺癌(47.8％,11/23)，但无显著性差异(χ2=2.89,P＞0.05)。CD44v6表达阳性率在胰腺癌组织学分级Ⅰ，Ⅱ，Ⅲ级分别为53.3％(8/15)，55.0％(11/20),66.7％(8/12)，其差异无显著性意义（P＞0.05）。
2.2 CD44v6表达与胰腺癌淋巴结转移的关系
47例胰腺癌中有淋巴结转移者21例，CD44v6阳性率为81.0％(17/21)；无淋巴结转移者26例，CD44v6阳性率为38.5％(10/26)，两者间有极显著性差异（χ2=8.58,P＜0.01）．
2.3 CD44v6表达与胰腺癌增殖活性的关系
47例胰腺癌组织PCNA表达分级：Ⅰ级8例，Ⅱ级14例，Ⅲ级15例，Ⅳ级10例。其中Ⅲ/Ⅳ级（高增殖活性）CD44v6阳性率为72.0％(18/25)，Ⅰ/Ⅱ级（低增殖活性）CD44v6阳性率为40.9％(9/22)，两者间有显著性差异(χ2=4.63,P＜0.05)。
2.4 CD44v6表达与胰腺癌患者术后1年生存率的关系
27例CD44v6阳性表达者1年生存率为3.7％(1/27)，而20例阴性者为30.0％(6/20)，两者间有显著性差异（χ2=6.28,P＜0.05)。
3 讨论
人CD44分子基因位于第11号染色体短臂上，全长50kb。它至少含有19个外显子，按外显子表达方式的不同，可分为组成性外显子（CD44s）和可剪接外显子（CD44v）。国外研究发现无转移能力的大鼠胰腺癌BSP73AS细胞株只表达CD44s，而有转移能力的BSP73ASML既表达CD44s，又表达CD44v，但后者比前者高10倍[1]。采用RT－PCR技术发现BSP73ASML细胞至少含有八至九种以不同方式组合的CD44v，这些CD44v转录因子均含有v6外显子（CD44v6），将CD44v6基因转染至BSP73AS细胞株中，则该细胞具有转移活性[2]。Mulder等[3]用特异性识别v6的单抗可以阻断转移的发生，使之难以形成转移灶。以上结果足以证明CD44v6在肿瘤转移生物学特性中是一非常重要的条件。近年来的研究发现CD44v6也在许多其它人实体肿瘤中表达，并与肿瘤转移有关[4，5]。本文研究发现有淋巴结转移的胰腺癌组织CD44v6表达阳性率明显高于无淋巴结转移者，且CD44v6阳性者术后1年生存率低于阴性者，并有显著性差异（P＜0.05）。另外作者通过对47例胰腺癌PCNA的检测发现CD44v6阳性表达者，其癌细胞增殖活性明显高于阴性者。说明CD44v6在胰腺癌的增殖及转移中起重要作用，表达CD44v6的癌细胞能够获得有利于浸润和转移的条件。CD44v6参与肿瘤转移的机制目前尚未阐明，可能在细胞－细胞，细胞－基质之间的特异性粘连过程以及细胞的迁涉运动中起一定作用[6]。
总之，我们认为通过对胰腺癌手术切除标本中CD44v6的检测，对患者术后的评估及体内残留癌细胞的预测都有重要意义。但CD44v6参与胰腺癌转移的机制以及其它几种CD44V与胰腺癌生物学特性的关系尚不清楚，这是有待进一步研究的课题。
参考文献
［1］Gunthert U,Hofmann M,Rudy W,et al. A new variant of glycoprotein CD44 confers metastatic potential to rat carcinoma cells. Cell,1991;65:13
［2］Rall CJ,Rustgi AK. CD44 isoform expression in primary and metastatic pancreatic adenocarcinoma. Cancer Res,1995;55:1831
［3］Mulder JW, Kruyt PM, Sewnath M, et al. Difference in expression of CD44 splice variant between proximal and distal adencarcinoma of large bowel.Br J Surg,1995;82(11):1468
［4］Kaufmann M, Heider KH, Sinn HP,et al. CD44 variant expression in primary breast cancer and length of survival. Lancet,1995;345:615
［5］Mirecka J,Mark D,Schauer A. Immunohistochemical localization of CD44v ariant 5 and 6 in human gastric mucosa and gastric cancer. Anticancer Res,1995;15:1459
［6］Jackson PA,Green MA,Pouli A,et al. Relation between stage,grade,proliferetion and expression of p53 and CD44 in adnomas and carcinomas of the colorectum. J Clin Pathol,1995;48:1098
(1999－09－16收稿)
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