多药耐药基因及相关蛋白基因在急性白血病中的表达

癌症 1999年第3期第18卷 论著摘要

作者：赖永榕　马吉力　周建生　宁自觉　卢玉英　牛威林

单位：广西医科大学一附院血液科(南宁，530021)

关键词：急性白血病；多药耐药基因；多药耐药相关蛋白基因；多聚酶链反应

　　中图号：R733.71　　文献标识码：A　　文章编号：1000－467X(1999)03－0336－02

　　多药耐药基因(Multidrug resistance gene,mdr₁)和多药耐药相关蛋白基因(Multidrug resistance—associated protein gene,MRP)的过度表达是引起急性白血病(AL)多药耐药(Multidrugresistance,MDR)发生的重要原因^〔1〕。我们用逆转录—多聚酶链反应(RT－PCR)技术同时检测40例成人AL患者的mdr₁和MRP的表达,并探讨它们与临床耐药的关系,现总结如下：

　　1　资料与方法

　　1.1　研究对象

　　40例病人均为我院住院病人,男28例,女12例，年龄16～61岁。其中急性髓细胞性白血病(AML)24例,急性淋巴细胞性白血病(ALL)16例。

　　1.2　RT－PCR方法

　　取病人骨髓标本,分离白细胞,用ATCG法提取总RNA。cDNA合成及PCR扩增方法参考文献^〔2,3〕。PCR产物用8％聚丙烯酰胺凝胶电泳分析、银染法染色照相,相片在cs－930型薄层双波长色谱扫描仪上扫描定量，用mdr₁(MRP)cDNA/β₂－MGcDNA比值来表示mdr₁(MRP)的表达水平。

　　1.3　统计处理

　　所有数据用PEMS医学统计软件包进行处理。

　　2　结果

　　2.1　耐药基因表达标准

　　2.1.1　mdr₁的表达：以同时见到mdr₁及β₂－MG扩增带为阳性，以mdr₁cDNA/β₂－MGcDNA比值≤0.4为低表达,＞0.4为高表达^〔4〕。

　　2.1.2　MRP的表达：以同时见到MRP及β₂－MG扩增带为阳性,以MRPcDNA/β₂－MGcDNA的比值≤1为低表达,＞1为高表达^〔2〕。

　　2.2　AML与ALL的mdr₁及MRP表达：(见表1)

表1　AML与ALL的mdr₁及MRP表达

病种	例数	阳性率(％)		表达水平(±s)
	24	mdr1	MRP	mdr1	MRP
AML	16	12(50.0)*	17(70.8)**	0.536±0.326Δ	0.489±0.426ΔΔ
ALL		7(43.8)*	12(75.0)**	0.643±0.140Δ	0.900±0.636ΔΔ
*x2=0.1504　　P=0.6976　　**x2=0.0836　　P=0.7720 　　Δt'=0.9980　　P＞0.05ΔΔ　　t'=1.9509　　P＞0.05

　　2.3　耐药组与非耐药组间mdr₁与MRP表达

　　按照临床耐药诊断标准^〔2〕,我们将40例病人分成两组：耐药组27例,非耐药组13例。结果见表2。

表2　耐药组与非耐药组mdr₁及MRP表达

组别	例数	mdr1(±s)	MRP(±s)
耐药组	27	0.680±0.273*	0.861±0.526**
非耐药组	13	0.351±0.133*	0.184±0.108**

　　^*t'=3.5311　　P＜0.05^**t="3.9930　　P=0.00052.4　耐药标准的评价：

　　我们以mdr₁及MRP高表达作为判断AL患者发生耐药的指标,根据临床耐药标准^〔2〕，按《临床流行病学》中所述的方法分别计算阳性预测值、阴性预测值、准确性。结果见表3。

表3　耐药标准的评价

　　3　讨论3.1　AL患者mdr₁和MRP表达

　　AML或ALL中mdr₁及MRP基因的表达水平各家报道不同,多数人认为AML与ALL患者间mdr₁及MRP的表达水平无明显差异^〔5〕,但也有报道认为ALL患者mdr₁及MRP的表达水平明显比AML患者高,并认为这是引起成人ALL患者化疗疗效不佳的原因之一^〔6〕。我们的结果认为AML与ALL患者间mdr₁及MRP基因的阳性率及表达水平无明显差异(P＞0.05)。造成结果差异的原因可能与检测的方法及定量标准不同有关。

　　3.2　AL患者mdr₁及MRP表达与临床耐药的关系

　　临床资料显示,mdr₁与MDR的相关性不容置疑。虽然MRP发现较晚,但已发现它与mdr₁类似,对AL预后有负性影响.我们的结果发现临床耐药组中阳性患者mdr₁及MRP的表达水平较非耐药组高(P＜0.05)。说明mdr₁和MRP的高表达与AL的临床耐药有关。

　　研究MDR的目的之一是为了更准确预测肿瘤耐药的发生,只有提高判断MDR的准确性,才能对于临床化疗药物的选择有帮助,而单一的检测手段判断MDR效果不理想,我们以mdr₁和MRP同时高表达作为判断MDR的标准,用临床耐药标准对其进行评价,发现其阳性预测值、准确性都有所提高,与杨仁池报道一致^〔2〕。

　　参考文献

　　1　Schneider e, Cowan KH, Bader H, et al. Increased expression of the multidrug resistance－associated protein gene in relapsed acute leukemia〔J〕. blood，1995，85：186.

　　2　杨仁池,杨纯正,郝玉书，等.白血病多药耐药相关蛋白基因和多药耐药基因的表达及其临床意义〔J〕.中华血液学杂志，1996，17(2)：67.

　　3　Noonan k.E, Beck C, Holzmayer T.A, et al. Quantitative analysis of mdr₁ gene expression in human tumors by polymerase chain reaction.〔J〕.Proc. natl. Acad.Sci，1990，87(9)：7160.

　　4　浦津,刘海川,楼方定，等.急性白血病多药耐药基因表达的临床研究〔J〕.中华内科杂志，1995，34(10)：655.

　　5　杨仁池,杨纯正,郝玉书，等.急性白血病多药耐药相关蛋白基因表达及其免疫类型和FAB分型的关系〔J〕.中华血液学杂志，1996，17(7)：340.

　　6　董作仁,罗建民,徐文新，等.急性白血病患者多药耐药mdr₁的表达及其临床意义〔J〕.中华肿瘤杂志，1997，19(1)：72.

收稿日期：1998－07－09；修回日期：1998－11－03