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MTT比色法测定药物对人宫颈肿瘤HeLa细胞作用的实验研究

MTT比色法测定药物对宫颈肿瘤HeLa细胞作用的实验研究

中国病理生理杂志 2000年第10期第16卷 第七届肿瘤和第八届免疫专业委员会学术会议论文摘要

作者:彭勤 彭惠 骆云鹏 汤为学

单位:彭勤 彭惠 骆云鹏(重庆医科大学附属一院眼科,重庆 400016);汤为学(重庆医科大学病理生理学教研室, 重庆 400046)

  目的:虽然子宫颈癌的手术或/和放射治疗取得了很大的成功,但仍有部分患者特别是局部肿瘤较大或有区域淋巴性转移,初治后易出现肿瘤未控,复发及转移。因此,们把注意力转移到化学治疗方面,们试行各种形式的化疗。此实验观察顺铂(cis-Platin,PDD)、5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-Fu)、甲氨喋呤(methotrexatum, MTX)三种化疗药物对宫颈肿瘤细胞(HeLa细胞)的作用,为临床用药提供一定的依据。方法:采用MTT测定法观察以上三个化疗药物单用及合用对HeLa细胞的影响。实验设试剂对照组、肿瘤细胞对照组及各种药物的试验组及各联合用药试验组。采用培养的对数生长期的HeLa细胞,调细胞浓度为5×104/mL,3种单药终浓度PDD为40,20,10,5及2.5μg/mL,5-Fu为400,200,100,50及25μg/mL及MTX为40,20,10,5及2.5μg/mL。每孔加药量20μL,每种剂量6个平行孔。两药合用(PDD+5Fu、PDD+MTX、5-Fu+MTX)采用两药合用比例为1∶1的方案,药物作用68 h后,500×g离心10 min,弃上清后,每孔加入MTT 20μL,37℃培养箱中培养4 h,再离心弃上清后每孔加二甲亚砜200μL,微量振荡器振荡5 min,自动酶标读数仪比色(波长600 nm)。流式细胞仪观察细胞周期的变化:先分为四组,每组细胞浓度为2×105/mL,即肿瘤细胞对照,PDD(5 μg/mL),5-Fu(50 μg/mL),PDD+5-Fu(5+50 μg/mL)组,药物作用48 h。细胞消化后,用PBS液洗涤两次,离心,弃其上清,吹打细胞,75%酒精(1~2 mL)固定,行流式细胞仪分析。结果:PDD和5-Fu 2个药物单独应用及合用时,随着药物剂量增加,其抑制效应也增加。ID505-Fu:为14.430 μg/mL, PDD:为0.604 μg/mL,PDD+5-Fu:为13.913 μg/mL(其中PDD 0.552 μg/mL),5-Fu 13.361 μg/mL)。流式细胞仪显示G0-G1%由67.10(对照)变化为79.51(PDD),36.65(5-Fu),72.54(PDD+5-Fu);G2-M%由11.94(对照)变化为0(PDD),22.94(5-Fu),0.51(PDD+5-Fu);S%由20.96(对照)变化为20.49(PDD),40.41(5-Fu), 26.95(PDD+5-Fu);Apoptosis%18.18(PDD),14.95(5-Fu),17.58(PDD+5-Fu);即PDD和PDD+5-Fu组G0-G1%期细胞明显增多,而5-Fu组S期细胞明显增加,并均见凋亡峰的出现。结论:MTT法是一种快速、简便的体外抗癌药物敏感性的测试法,该方法结果准确,可靠。在此条件下甲氨喋呤无抑制细胞的作用,顺铂和5-氟尿嘧啶能有效抑制HeLa细胞的生长。


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