痰结核分支杆菌DNA扩增对肺结核疗效监测
中华结核和呼吸感染 1998年第10期第21卷 论著摘要
作者：郭天程 唐敏章 王效民 党波 王永兴 江玲 敬梅 任康美
单位：710054 西安，解放军第四五一医院呼吸内科(郭天程、王效民、党波、王永兴、江玲、敬梅、任康美)；第四军医大学唐都医院呼吸内科(唐敏章)
为评价聚合酶链反应(PCR)痰结核分支杆菌DNA(TB-DNA)扩增对肺结核疗效监测的实用价值，对31例初治涂阳肺结核患者进行了2年的随访研究。
对象 随机选择初治涂阳肺结核34例，男24例，女10例，年龄19～58岁。痰涂片抗酸染色和PCR检查阳性，胸部X线示肺部有不同程度改变，初治行2HRZE/4H3R3方案；观察期间复发者用2SHRZE/6H3R3E3方案治疗。3例失访，有完整资料者31例。阴性对照10例(支气管扩张症和肺癌各5例)，随访6月。
方法 治疗期间每月及治疗结束后每2月查痰1次，共收集标本525份，其中肺结核标本485份，将标本随机编码，盲法送检。痰涂片按萋尼法进行抗酸染色，油镜下观察300个视野，3个菌以上为阳性。PCR检测的痰标本经前处理和DNA提取后，以Manjunath等［1］报道的结核分支杆菌MPB64蛋白编码基因部分序列为引物，置扩增仪内扩增，取扩增产物5μl，2%琼脂糖凝胶电泳，紫外线下观测，阳性者可见240 bp区带。
结果 31例肺结核经治疗至第4个月痰涂片均转阴(第1、2、3个月转阴数分别为8、18、5例)；痰PCR有27例于第5个月转阴(第1、2、3、4个月分别为1、6、12、8例)，余4例痰PCR持续阳性时间较长，其中2例第12和14个月痰涂片复阳，另2例分别在第12和16个月痰PCR转阴。观察期间对照组痰涂片和PCR均为阴性。31例肺结核共检标本485份，431份痰涂片和PCR结果一致。痰涂片检查第1和2月转阴较多，痰PCR第3、4月转阴较多。痰PCR转阴时间比涂片晚1、2、3个月的患者分别为17、5、2例，有3例同时转阴，另2例痰PCR比涂片晚10和14个月转阴。随访期间31例中有3例复发，其中1例痰涂片和PCR在治疗早期转阴后，于第12和14个月痰PCR和涂片先后复阳；余2例治疗早期涂片转阴，X线提示病变稳定，但痰PCR持续阳性，并于第12和14个月痰涂片复阳。3例复发患者复治后分别在第2～3个月痰涂片转阴，第3～5个月痰PCR转阴。
讨论 对31例初治涂阳肺结核患者进行了24个月随访研究，发现经6月短程化疗所有患者治疗均有效，痰涂片在第1～3个月转阴，痰PCR绝大多数患者(27例)在治疗结束前亦转阴，转阴率分别为100%和87%，两者比较差异无显著性(P＞0.05)。痰涂片和PCR结果总符合率较高(89%)。4例痰PCR未能及时转阴，阳性时间长达1年余，其中2例自行转阴，2例痰涂片复阳，因此不排除这4例患者虽经治疗痰中仍有少量细菌长期存在的可能，在细菌减少到一定程度时，痰涂片可转阴，但敏感性高的PCR方法可出现阳性。总之痰PCR tB-DNA检测对肺结核疗效的监测与传统的痰涂片方法比较有较高的一致性和敏感性，对于痰PCR长期阳性者要注意结核复发的可能。
参考文献
1Manjunath N, Shanker P, Rajan L, et al. Evaluation of a polymerase chain reaction for the diagnosis of tuberculosis. Tubercle, 1991,72:21-27.
(收稿：1998-04-21 修回：1998-07-14)
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