胰腺癌细胞系ASPC-1凋亡过程中bcl-2和bcl-xL的表达
中华实验外科杂志 2000年第2期第17卷 论著摘要
作者：孙海晨 钱晓明 唐文杰 徐建强 吴学豪
单位：(210002 南京军区南京总医院急诊科)
本研究旨在探讨bcl-2和bcl-xL在干扰素(IFN)-r诱导的胰腺癌细胞系ASPC-1细胞凋亡过程中的表达情况。
一、材料与方法
ASPC-1细胞系于含体积分数为10%胎牛血清DMEM培养基中传代培养。将细胞浓度调整至1×109个/L，无血清培养24 h。向培养基内加入IFN-r(终浓度1×106?U/L)。继续培养，分别于6、12和24 h收集细胞进行检测。以不加IFN-r的培养皿为对照组。收集的细胞洗涤后用荧光染料碘化丙啶(PI)染色，然后进行流式细胞分析。细胞凋亡数量以凋亡细胞的百分数表示。
bcl-2和bcl-xL的检测采用免疫印迹(western blot)法。收集的细胞裂解后聚丙烯酰胺凝胶电泳约45 min(电压160 V)。电泳后蛋白质转移至硝酸纤维膜上。将硝酸纤维膜于加有抗bcl-2和bcl-xL多克隆抗体(Santz Cruz)的缓冲液中孵育1 h，清洗后再于过氧化物酶标记的二抗缓冲液中孵育1 h。最后通过ECL系统显影、曝光、冲洗胶片、分析。
二、结果
传代的ASPC-1细胞经无血清培养并加入IFN-r刺激后出现细胞凋亡，且随时间延长凋亡数量逐渐增多。对照组bcl-2和bcl-xL都为轻度表达(表1)
表1 ASPC-1细胞凋亡过程中bcl-2和bcl-xL的表达(
±s)
| 组别 |
时间
(h) |
bcl-2 |
bcl-xL |
| 对照组 |
|
90.76±
13.09 |
78.90±
21.12 |
| IFN-γ组 |
6 |
93.67±
9.29 |
130.33±
26.21* |
| |
12 |
88.09±
5.57 |
232.33±
34.31* |
| |
24 |
129.69±
12.74 |
106.02±
39.05* |
注：数值单位为相对吸光度 与对照组比较，*P＜0.05
三、讨论
本研究结果显示，在ASPC-1细胞凋亡过程中，bcl-2和bcl-xL表达，但两者的表达规律不同。bcl-xL表达随着凋亡细胞的增多而逐渐减弱，而bcl-2则在细胞凋亡增多时强表达，说明在ASPC-1的凋亡过程中存在着抗凋亡机制。
(收稿日期：1999-07-06)
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