¹³¹I-chTNT在荷人肝癌裸鼠动物模型中的定位研究

中华核医学杂志 1998年第4期第卷 论著

单位：200032　上海医科大学附属中山医院核医学科(陈绍亮、孙晓光、修雁、李文罡);上海医科大学药学院(钟高仁),实验动物教研室(乔伟伟、许兰文)

　　关键词： 肝细胞瘤；动物，实验；小鼠，裸；放射免疫检测；放射免疫疗法

　　【摘要】　目的　评价¹³¹I-单克隆抗体chTNT与肝肿瘤的亲和性,以了解其用于肝肿瘤定位诊断和导向治疗的可能性。方法　荷人肝癌裸鼠动物模型腹腔注射5.55MBq ¹³¹I-chTNT后1、2、3、5、7天,分别作放射免疫显像,并逐日分组杀死,行组织分布测定,并与¹³¹I对照组比较。结果　实验组注射标记抗体后1天肿瘤组织清晰显影,并持续显示至实验结束。瘤体内放射性维持相对稳定水平,¹³¹I-chTNT在肝癌组织内的有效半减期为6.0±1.6天。其他脏器组织放射性浓聚少,并逐渐消失。第7天T/NT比值达10.67。结论　¹³¹I-chTNT具有导向肝肿瘤的特性,为用于肝癌放射免疫显像和导向治疗提供了依据。

Localization of ¹³¹I-chTNT in a nude mice model with human hepatoma

Chen Shaoliang, Sun Xiaoguang, Xiu Yan, et al. Zhongshan hospital, Shanghai Medical University, Shanghai, 200032

　　【Abstract】　Purpose　In order to evaluate the targeting activity in the animal model with human hepatoma, the ¹³¹I-chTNT radioimmunoimaging was explored.Methods　Radioimmunoimages were taken on different intervals after injection of ¹³¹I-chTNT 5.55MBq to the nude mice, and tissue distribution was measured. The results of ¹³¹I-chTNT monoclonal antibody group were compared with that of ¹³¹　I control group.Results　The experimental group developed tumor positive images after one day of radio-labeled monoclonal antibodies injection and held on until the end of the experiment. The radioactivity in tumor mass was stable, and the half life of ¹³¹I-chTNT in hepatoma mass was 6.0±1.6 days. There was no special radioactivity accumulation in normal liver tissue in the nude mice and the radioactivity in it disappeared rapidly. Statistics indicated the tumor/liver ratio in 1, 2, 3, 5, 7 days were 1.03, 2.43, 5.71, 7.96, 10.67, respectively.Conclusions　Our results suggest that ¹³¹I-chTNT monoclonal antibody has a considerable targeting activity, and provide an evidence for that it can be used as a new radiopharmaceutical agent for the imaging and radio therapy of hepatoma.

　　【Key words】　Hepatoma　　Animals, laboratory　　Mice, nude　　Radioimmunodetection

　　Radioimmunotherapy

　　为了解放射性核素标记抗肿瘤坏死细胞单克隆抗体(chTNT)的作用特性,为临床进行肿瘤显像和治疗提供资料,我们用¹³¹I标记chTNT作荷人肝癌模型放射免疫显像,探讨其用于肝肿瘤定位及导向治疗的可能性。

　　材料和方法

　　1. 实验动物。SPF级BALB/c裸小鼠,5～6周龄,由上海市肿瘤研究所提供,实验条件符合SPF要求,所用物品均经高压灭菌消毒。

　　2. 荷人肝癌裸鼠动物模型。在无菌条件下,将传代于裸鼠皮下的人肝癌瘤体(由上海医科大学肝癌研究所提供)切成2mm³大小,置生理盐水中备用。接种时用20号穿刺针将瘤块移植至裸小鼠近前肢背侧部,数周后待肿瘤长至直径1cm,用于研究^〔1,2〕。

　　3. 放射性药物。¹³¹I-chTNT(上海华晨治癌药业有限公司)比活度为370MBq/mg,放化纯度大于95%,免疫活性大于50%,经无菌、无热原检查均合格。标记品保存在4±2℃冰箱中,使用前用4%HSA、0.9%生理盐水稀释。

　　4. 实验分组。荷人肝癌裸鼠实验动物模型18只,随机分为6组,每组3只。实验前3天开始在饮水中加入复方碘溶液封闭甲状腺,并饮用至实验结束。实验组共5组,每只鼠分别经腹腔注入5.55MBq ¹³¹I-chTNT。另1组为对照组,经腹腔注入¹³¹I 5.55MBq。各组动物分别于注射后0、1、2、3、5、7天进行γ显像,并从第一天后依次处死一组实验组动物,对照组于第7天与实验组第5组一同处死。

　　5. 放射免疫显像。显像仪器使用Elscint SP-6 SPECT仪,高能通用型准直器,放大倍数4,预置计数1×10⁵,记录每次显像所用时间,经衰变校正后计算裸鼠机体和瘤体残留放射性。划取全鼠、瘤体和除瘤体外全鼠的感兴趣区,分别计算瘤体放射性占全鼠放射性的比值和肿瘤与周围组织放射性比值(T/NT)^〔3〕。

　　6. 组织分布测定。自注射后第1天起,每次γ显像完成后依次将一组动物模型眼眶放血,拉颈处死,留取血液并称重,打开腹腔取心、肝、脾、胃、肺、肾、骨、肌肉及瘤体。各组织脏器称重后置井型计数器计数,换算成每克组织的放射性,计算T/NT比值。

　　结　　果

　　1. 荷人肝癌裸鼠实验动物模型的放射免疫显像。实验组腹腔注射¹³¹I-chTNT 1天后,肿瘤区域明显浓聚放射性(附图a),T/NT比值为2.1±0.6。以后裸鼠体内放射性逐步下降,而瘤体内放射性持续存在并维持较高水平,至第7天肿瘤影仍清晰显示(附图b),7天后T/NT比值为9.6±3.8。对照组肿瘤内始终未浓聚放射性,且¹³¹I被迅速排出体外,有效半衰期为2.1±0.1天;而¹³¹I-chTNT在裸鼠体内的有效半衰期为3.4±1.2天,瘤体内为6.0±1.6天。

　　2. ¹³¹I-chTNT的组织分布和T/NT比值。腹腔注射¹³¹I-chTNT后,即被吸收入血液中,1天后达高峰(2556.38±1270.15计数/mg),以后逐日下降,至第7天降至162.86±19.57计数/mg。¹³¹I-chTNT除分布于肝肿瘤组织内,尚有部分存在于裸鼠肝脏正常组织中,少量分布于肾、肺、脾、胃、骨、肌肉等组织。肝脏中放射性逐渐下降。瘤体内放射性自第2天达高峰后维持一定水平数天。

　　¹³¹I-chTNT注入后连续7天的组织分布测定得出的T/NT比值以及对照组注射¹³¹I后7天的T/NT比值见附表。

附表　¹³¹I-chTNT在荷人肝癌裸鼠模型中的T/NT比值(±s)

　　讨　　论　　本实验结果提示,¹³¹I-chTNT与肝癌组织(确切地说与肝癌坏死组织)有亲和力。肿瘤组织,尤其是肝肿瘤在其增长过程中往往存在许多死亡或变性、坏死的细胞。依据这一特性,放射性核素标记chTNT可被特异地引入肿瘤组织,从而达到诊断和治疗疾病的目的。肿瘤细胞在分裂后很快出现变性,致细胞膜表面渗透性改变,细胞膜完整性丧失等,这些改变在肿瘤早期即已发生。¹³¹I-chTNT能穿过这些肿瘤细胞膜与核内抗原结合。¹³¹I-chTNT与肝癌组织的结合牢固而持久,本实验追踪至第7天,肿瘤组织内仍保持基本稳定的放射性,且在瘤体内有效半减期较长。¹³¹I-chTNT在正常组织器官中没有特异性吸收,保持了较高的T/NT比值。这为临床上应用¹³¹I-chTNT治疗肿瘤提供了可能。¹³¹I-chTNT毒理学和药效学研究已在进行,以对其进行安全性和治疗效果的评价;对¹³¹I-chTNT与其他类型肿瘤的亲和力也在进行研究,以确定其“抗癌谱”。

附图　腹腔注射¹³¹I-chTNT后荷人肝癌裸鼠放射免疫显像。a.第1天；b.第7天

　　参　考　文　献

　　1　龚奕, 刘康达, 周铭, 等. ¹³¹I-抗HBxAg人/鼠嵌合抗体在裸鼠人肝癌模型定位的初步研究. 中华核医学杂志, 1997, 17:98-100.

　　2　刘康达, 汤钊猷, 谢弘, 等. ¹³¹I-抗人肝癌细胞株(BEL-7420)单克隆抗体在裸鼠人肝癌模型中的定位. 中华核医学杂志, 1989, 9:175-176.

　　3　DeNardo GL, Kukis DL, Shen S,e t al. Efficacy and toxicity of ⁶⁷Cu-21T-BAT-Lym-1 radioimmunoconjugate in mice implanted with human burkitt's lymphoma (Raji). Clin Cancer Res, 1997, 3:71-79.

(收稿：1998-02-04　　修回：1998-04-14)