ACE基因多态性与胰岛素依赖性糖尿病肾病

中国急救医学 1999年第3期第19卷 论著

作者：吴红赤　殷恒强　邸　波　王守仁

单位：哈尔滨医科大学第一临床医学院泌尿内科(150001)

关键词：血管紧张素转换酶基因；胰岛素依赖性糖尿病；糖尿病肾病；基因多态性

　　［摘　要］　目的　探讨ACE基因多态性与糖尿病肾病的关系。方法　用扩增片段长度多态度性的方法，对42例胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)患者和相应例数的正常人，进行了ACE基因多态性分析。结果　IDDM患者和正常人之间ACE基因插入(I)/缺失(D)多态性频率差异不显著，IDDM伴肾病组D等位基因频率明显高于IDDM不伴肾病组(P＜0.05)，DD基因型也有相同趋势(P＜0.1)。结论　ACE基因缺失型(D)等位基因和缺失型基因型(DD)与IDDM合并肾病的发病可能有关。

ACE polymorphism and the insulin dependent diabetes mellius

Wu Hongchi，Yin Hengqiang，Di Bo，et al.

　　Department of Urology，First Affiliated Hospital，Harbin Medical University Harbin 150001

　　［Abstract］　Objective　To investigate the relationship between the ACE polymorphism and the diabetes nephropathy.Methods　ACE polymorphism is analyzed in 42 IDDM patients and the normal people with the same numbers by using the method of RFLP.Results　The difference of ACE gene inserting(I)/defauling(D) rates between the IDDM patients group and the normal people group is not significant.D allele rates of IDDM group with nephropathy is higher than that of the group without nephropathy.DD gene has the same trend.Conclusion　IDDM with nephropathy syndrome relates to the ACED allele and DD genotype probably.

　　［Key words］　ACE genotype　Insulin dependent diabetes mellius(IDDM)　Diabetes nephropathy　Gene polymorphism

　　胰岛素依赖性糖尿病(IDDM)病人有很多并发症，但其中主要的并发症和死亡原因为糖尿病肾病，临床工作中我们发现同样为IDDM患者，在不同的个体发生肾病的情况也不尽相同，因此我们考虑到个体基因背景在其发病中可能起到重要的作用。许多研究表明，遗传因素与糖尿病肾病的易感性有关^［1］，根据国外有关文献报导，我们选择了血管紧张素转化酶(ACE)基因进行研究，以期阐明ACE基因与糖尿病肾病之间的关系。

　　1　资料与方法

　　1.1　研究对象　42例IDDM病人，诊断标准符合WHO IDDM的诊断标准，均接受胰岛素治疗，年龄21～44岁，病程6～28年，男23例，女19例。其中尿白蛋白排泄率＞20μg/min者16例，为IDDM伴肾病组，年龄22～40岁，病程8～19年，其中尿白蛋白排泄率为308.2±174.8μg/min；尿白蛋白排泄率＜20μg/min者26例，为IDDM不伴肾病组，年龄20～45岁，病程5～26年，其尿白蛋白排泄率为14.8±1.9μg/min。正常对照组42例，为年龄、体表系数等相适应的人，无内分泌疾病，心、肝、肾功能正常。

　　1.2　方法

　　1.2.1　人类基因组DNA提取：均于禁食12小时后次晨采静脉血，用EDTA抗凝，用蛋白酶K及酚/氯仿抽提，酒精沉淀，DNA溶于TE缓冲液100ml在-20℃贮存。

　　1.2.2　聚合酶链反应(PCR)，参考国外有关文献^［2］，其引物序列为：引物1.5′-CTGGAGACCACTCCCATCCTTTG-3′，引物2.5′-GATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3′。PCR反应体积50μl，模板DNA1.0μg，引物各10pmol,MgCl₂ 1.0mmol,dNTP 0.2mmol,10×Buffer 5.0μl,Taq DNA聚合酶(Promega)1.0U。PCR反应条件为：96℃，1min；55℃，1min；75℃，2min，35个循环，在PE480型扩增仪上完成扩增。

　　1.2.3　电泳结果　取PCR产物20μl，经2%琼脂糖凝胶电泳，溴化乙锭染色，紫外光下观察结果。

　　1.2.4　尿β₂微球蛋白测定　应用我院常规方法测定。

　　1.2.5　统计学分析　组间ACE基因多态性频率比较采用χ²检验。

　　2　结果

　　2.1　ACE基因多态性　PCR扩增后有三种基因型即I/I、D/D和I/D基因型，插入型(I)扩增片段长度约为490bp，缺失型(D)扩增片段长度约为190bp，Marker为PGEM7 zf(+) Hae Ⅲ。其电泳结果见附图。

图1　ACE基因多态性

　　1　为分子量标记；2，4，5为插入(I)和缺失(D)杂合子基因型；

　　3，6为I纯合子基因型；7为D纯合子基因型。

　　2.1.2　IDDM患者和正常人ACE基因多态性比较见表1，从表1中可以看出，等位基因频率χ²=0.76，P＞0.05；基因型频率χ²=5.05，P＞0.05。

表1　IDDM和正常人ACE基因多态性频率比较(%)

　　2.1.3　IDDM伴肾病组和不伴肾病组ACE基因多态性频率比较见表2，从表2中可以看出，等位基因频率χ²=5.99，P＜0.05，比值比(OR值)=2.30，基因频率χ²=5.49，P＞0.05。

表2　IDDM伴肾病组与不伴肾病组ACE基因多态性比较(%)

　　3　讨论　　研究结果表明，IDDM和正常人之间ACE基因I/D多态性频率差异不显著，表明ACE基因与IDDM的发病无关，至于ACE基因D等位基因与IDDM肾病的关系，可能通过改变肾小球局部血管紧张素系统的活性和使血管舒张因子缓激肽的失活，从而导致肾小球血流动力学的改变，肾小球的系膜细胞和内皮细胞有ACE mRNA的表达，也进一步支持这种可能性^［3］。从研究结果中可以看出，IDDM伴肾病者D等位基因频率明显高于IDDM不伴肾病者(P＜0.05)，DD基因型频率也有相同的差异趋势(P＜0.1)，Ⅱ型基因在肾病组与不伴肾病组基因频率无明显差异(P＞0.05)，说明Ⅱ型是糖尿病肾病的保护性基因，而D型或DD型则为其易感性基因^［4］，其中尤其D等位基因与IDDM肾病的发生可能有关，与国外有关报道相似^［5］。以上结果提示，ACE基因变异可赋予IDDM患者糖尿病肾病的遗传易感性，一般认为ACE可能并未影响全身血压，而只是使肾脏血液动力学发生改变。在肾脏ACE是激肽释放酶—激肽系统的组成部分，ACE可使缓激肽失活，同时使AT-Ⅱ生成增多，即可影响肾脏血液动力学，使肾小球滤过压增高，这便是糖尿肾病的早期表现之一^［6］。

　　参考文献

　　1　Seaguist ER，Gtoetz FC，Rich S， et al.Familial clustering of diabetic kidney disease:evidence for genetic suscepitbility to diabetie nephropatby.N Eng I J Med,1989,320:1161

　　2　Hubert C,Houot AM,Coruol P,et al.Structure of the angiotensin I converting enzyme gene,two alternate promoters correspond to evolutionary steps of a duplicated gene.J Biol chem,1991,266:15377

　　3　Ballerman BJ，Ieidel ML,Cunnign ME,et al.Vasoactive peptides and the kidney.In:the kidney,4th ed.Brenner BM eds Philadelphia:Saunders,1991.510-583

　　4　Doria A,Warram JH,Krolewski AS.Genetie predietion to diabetie

　　nephrophy evidenee for a role of the angiotensin I Converting enzyme

　　gene.Diabetes,1994,43:69

　　5　Marre M，Bernadet P,Gallois Y,et al.Relationship between angintesin I

　　converting enzyme gene polymorphism,plasma levels,and diabetic retinal

　　and renal complications.Diabetes,1994,43:384

　　6　王雪，等.血管紧张素转换酶基因多态性与疾病易感性的关系.《国外医学》内分泌分册，1996，4：191

(收稿：1998-02-17，修回：1998-10-20)